寡核苷酸藥物是一種能夠靶向mRNA的短片段的RNA或DNA序列及其衍生物的藥物，它們可以通過調節mRNA的轉錄過程，從而控制致病蛋白的表達，進而發揮治療疾病的效果。寡核苷酸藥物具有高度的特異性和選擇性，可以針對特定的基因或信號通路進行調控，從而治療一些難以用傳統藥物治療的疾病，如遺傳性疾病、腫瘤、感染性疾病等。在目前獲得市場批準的15種寡核苷酸藥物中，ASO（反義寡核苷酸）占據了大部分，只有一種是Aptamer（核酸適配體），還有四種是siRNA（小干擾RNA），其中的三種進行了GalNAc的修飾。在目前對于寡核苷酸類藥物的定量分析在對其候選化合物的PK和TK評估過程中，目前主流的方式是LC-MS/MS和LC-FLD，LC-FLD（液相熒光平臺）具有靈敏度高、選擇性好、操作簡便、成本低等優點，是寡核苷酸藥物分析中的一種重要方法[1]。檢測原理
利用LC-FLD定量分析寡核苷酸類藥物的基本方法和原理是先通過加熱使雙鏈DNA分離，通過在冷卻過程中加入帶有熒光基團的肽核酸（PNA）探針基于堿基互補配對原則與反義鏈的結合，如圖1。PNA是一種DNA模擬物，其特點是多肽骨架取代了DNA的磷酸主鏈[2]。由于PNA沒有負電荷，因此它與DNA和RNA之間沒有靜電排斥力，這使得它們的結合穩定性和特異性都得到了顯著提高。
熒光檢測方法的優勢
LC-FLD（液相熒光平臺）是一種利用堿基互補配對原理和熒光檢測技術來測量寡核苷酸藥物濃度的方法，它相對于LC-MS（液質聯用平臺）方法的優勢有以下幾點：
靈敏度高：LC-FLD可以實現寡核苷酸的熒光檢測，具有靈敏度高的特點，可以比LC-MS高出10倍，適用于低濃度的樣本分析。
成本低：LC-FLD使用的儀器和試劑相對于LC-MS更為簡單和便宜，可以節省研發成本和時間。
操作簡單：LC-FLD不需要復雜的質譜參數設置和優化，只需要選擇合適的熒光探針和流動相條件，就可以實現寡核苷酸的檢測。
然而，由于需要通過液相分離來實現選擇性，將干擾物或代謝物分離出來，因此，熒光分析方法通常需要比質譜方法更長的分析時間。
圖1. 熒光檢測的原理